質(zhì)粒提取原理及流程
更新時(shí)間：2010-03-08 | 點(diǎn)擊率：8827
質(zhì)粒提取原理及流程：
較常用的質(zhì)粒DNA提取方法有3種：堿裂解法、煮沸法和去污劑
（如Triton和SDS）裂解法。前兩種方法比較劇烈，適用于較小的質(zhì)粒
（<15kb）。去污劑裂解法則比較溫和，一般用于分離大質(zhì)粒（>15kb）。
堿裂解法是一種應(yīng)用為廣泛的制備質(zhì)粒DNA的方法，其原理
為：染色體DNA比質(zhì)粒DNA分子大得多，且染色體DNA為線狀分
子，而質(zhì)粒DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子；當(dāng)用堿處理DNA溶液時(shí)，
線狀染色體DNA容易發(fā)生變性，共價(jià)閉環(huán)的質(zhì)粒DNA在回到中性
時(shí)即恢復(fù)其天然構(gòu)象；變性染色體DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞
碎片結(jié)合形成沉淀，而復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒DNA分子則以溶解狀態(tài)
存在液相中，離心去除沉淀后，就可從上清中回收質(zhì)粒DNA。
目前，市面上質(zhì)粒提取試劑盒大多數(shù)都是采取上述的堿裂解方法，
不同之處在于純化方式。目前比較常用的純化系統(tǒng)是硅基質(zhì)吸附材
料，其原理為在高鹽環(huán)境下質(zhì)粒DNA能夠結(jié)合到硅基質(zhì)上，然后用
低鹽緩沖液或水將質(zhì)粒DNA從硅基質(zhì)上洗脫下來。得到的質(zhì)粒可以
用于酶切、PCR、測(cè)序、細(xì)菌轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
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