QuickShuttle轉(zhuǎn)染試劑www.skhzyhs.com
QuickShttleTM Transfection Reagents
（#KX0110041，0.8 ml ）
產(chǎn)品描述：
QuickShuttle是上海索萊寶生物科技有限公司新近研發(fā)的陽(yáng)離子轉(zhuǎn)染試劑，具有、低毒和易于使用等優(yōu)點(diǎn)，推薦用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染以及穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建，可以將轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)操作縮短到一分鐘即可完成。
重要提示：
1、以24孔細(xì)胞板轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)為例，推薦一次（即每孔）轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的低內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA用量為2ug，轉(zhuǎn)染試劑用量為3-5ul（轉(zhuǎn)染試劑的適用量需要根據(jù)不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基來(lái)優(yōu)化，但理論上不超出3-5ul范圍），轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中使用無(wú)菌生理鹽水稀釋質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑即可。
2、為獲得高轉(zhuǎn)染效率并盡可能降低細(xì)胞毒性，建議轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在50-80%范圍內(nèi)，而且在不影響轉(zhuǎn)染效率的前提下，盡可能減少轉(zhuǎn)染試劑的用量。
3、QuickShuttle轉(zhuǎn)染試劑極大簡(jiǎn)化了轉(zhuǎn)染步驟，轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒混合后無(wú)需室溫靜置孵育，可直接加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，而且無(wú)需在轉(zhuǎn)染后補(bǔ)加血清和更換培養(yǎng)基。
4、如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诤Y選抗藥性穩(wěn)定細(xì)胞系，使用QuickShuttle進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)可做進(jìn)一步簡(jiǎn)化，即細(xì)胞傳代后可直接進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，從而節(jié)省了18-24小時(shí)的轉(zhuǎn)染前細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間。
5、QuickShuttle轉(zhuǎn)染試劑建議儲(chǔ)存溫度為2-8℃，但在-30℃到室溫范圍內(nèi)均可長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定保存。
轉(zhuǎn)染步驟：
下述所有實(shí)驗(yàn)步驟均針對(duì)哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞在24孔細(xì)胞板中的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)優(yōu)化建立，不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基可能需要優(yōu)化轉(zhuǎn)染試劑的用量以獲得佳實(shí)驗(yàn)效果。質(zhì)粒DNA：請(qǐng)用能夠去除內(nèi)毒素的方法制備高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，高壓消毒或除菌過(guò)濾。
1.轉(zhuǎn)染前18-24小時(shí)接種細(xì)胞到24孔細(xì)胞板中，每孔5-10*104細(xì)胞，1ml*培養(yǎng)基。備注：如果篩選抗藥性穩(wěn)定細(xì)胞系，可以考慮簡(jiǎn)化的實(shí)驗(yàn)步驟，即在細(xì)胞傳代后直接按下述步驟2-5進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，無(wú)需18-24小時(shí)的等候時(shí)間。
2.將2ug質(zhì)粒DNA和3-5ul轉(zhuǎn)染試劑分別稀釋到50ul生理鹽水中。備注：轉(zhuǎn)染試劑的適用量需要根據(jù)不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基來(lái)優(yōu)化，但理論上不超出3-5ul范圍。
3.合并上述兩溶液并混勻。備注：無(wú)需其他轉(zhuǎn)染試劑所需的10-30分鐘的等待時(shí)間。
4.將上述復(fù)合物直接加入到24孔細(xì)胞板中的細(xì)胞培養(yǎng)基中，輕搖細(xì)胞板以混勻。備注：轉(zhuǎn)染復(fù)合物可直接加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。在極少情況下會(huì)出現(xiàn)貼壁細(xì)胞脫落現(xiàn)象，可先從待轉(zhuǎn)染細(xì)胞孔中吸取500μl培養(yǎng)基與轉(zhuǎn)染復(fù)合物預(yù)混后再加入細(xì)胞中；若在細(xì)胞瓶中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，直接加入到無(wú)細(xì)胞貼壁的側(cè)面并搖勻即可。
5.將細(xì)胞板移至37℃/5%CO2孵箱中進(jìn)行培養(yǎng)。備注：無(wú)需在轉(zhuǎn)染后4-6小時(shí)補(bǔ)加血清或更換培養(yǎng)基。
6.24-72小時(shí)后根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)分析或穩(wěn)定細(xì)胞系加壓篩選。
附表：
培養(yǎng)器皿
表面積（cm2）
培養(yǎng)基用量（ml）
DNA用量（μg）/生理鹽水用量（μl）
轉(zhuǎn)染試劑用量（μl）/生理鹽水用量（μl）
96孔板
0.4
0.2
0.4/25
0.8/25
24孔板
2
1
2/50
4/50
12孔板
4
1.5-2
4/50
8/50
6孔板（包括35mm培養(yǎng)皿）
9
2-3
8-10/100
16-20/100
60mm培養(yǎng)皿
27
6-8
20-25/200
40-50/200
25 cm2培養(yǎng)瓶
25
6-8
20-25/200
40-50/200
100mm培養(yǎng)皿
75
15-20
40-50/400
80-100/400
75 cm2培養(yǎng)瓶
75
20-25
40-50/400
80-100/400